4大蛋白定量技术选择指南

　　“低丰度蛋白测不到、样本量少不够用、想多因子同步检测、特殊样本难处理……生物科研中，蛋白定量的场景需求千差万别，选对方案比选贵方案更重要。本文聚焦4大主流技术，从原理、特点、应用场景三维度梳理，帮您匹配专属蛋白定量方案！”

　　首先为您总结热门研究领域常见蛋白检测指标：

　　蛋白检测技术如今已是百花齐放，为了便于区分，我们从灵敏度、检测指标数量、检测成本三个核心维度，对常见技术做了归类梳理。可以发现：不同技术的优势各有侧重，并没有哪一种能满足所有需求。所以在实际选择时，不用纠结“全能”，瞄准自己实验最核心的需求即可。

　　常见蛋白检测技术中，Simoa和MSD的灵敏度最高，可达fg/ml级别，Simoa基于“单分子捕获”，因此更适用于单个超低丰度蛋白的检测，MSD基于电化学发光原理，因此在灵敏度高的同时可以检测10个因子；hsELISA和HICA属于升级版的ELISA，是灵敏度略高的单因子检测技术；somalogic和Olink主打检测指标多，单次可测1000+指标，多用于组学检测；Luminex和CBA灵敏度通常在pg/ml级别，检测指标单次可达50+因子，且单价低，广泛适用于基础多因子筛选。基于实用性的考虑，我们选择了4种代表性技术进行介绍。

　　首先来看下ELISA、Luminex、MSD、CBA技术的参数对比。

　　4种蛋白定量技术参数对比

　　01

　　ELISA

　　常规ELISA

　　原理

　　通过酶促反应放大信号，以吸光度实现定量。

　　特点

　　应用广泛：经典技术，多种实验中经过验证；

　　价格实惠：单价低，配合酶标仪使用，使用门槛低；

　　性能适中：灵敏度和检测范围满足常规单子检测需求。

　　适配

　　单指标检测；

　　需要充足样本量；

　　适配中等丰度蛋白检测。

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　　One-step ELISA

　　原理

　　将传统Elisa中的“一抗孵育”和“二抗孵育”两个步骤合并为一步完成，仅需一次孵育就能完成抗原-抗体的结合。

　　特点

　　极速省时：1块板仅需1h，5块板仅需1.5h；

　　节省样本：每孔仅需50μl；

　　高灵敏度：灵敏度低至0.13pg/ml；

　　操作极简：仅需1次孵育+1次洗板。

　　适配

　　单指标检测；

　　追求实验效率。

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　　酶标仪

　　优势

　　可检测功能：吸光度、化学发光、荧光强度；

　　高灵敏度滤光片保证荧光强度，32位滤光片转轮，任意组合；

　　传承高灵敏度特点、检测性能更佳。

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　　02

　　Luminex

　　原理

　　磁珠包被特异性抗体，通过悬浮液相芯片技术检测多因子。

　　特点

　　高通量：可检测1-115个因子；

　　高灵活度：可自定义微球编码和抗体偶联，适应不同需求；

　　操作流程精细：需提前稀释和处理，确保样本适合检测。

　　适配

　　生物标志物筛选；

　　批量样本多因子检测。

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　　03

　　MSD

　　原理

　　石墨烯电极板通电后，标记物发生氧化还原反应循环释放光子，信号转化为电信号定量。

　　特点

　　多因子检测：同时检测1-10个指标；

　　超高灵敏度：低至0.54fg/mL；

　　宽动力学范围：5-6个logs；

　　样本需求量少：仅需10-25μL样本量；

　　抗基质干扰强：无需复杂前处理即可检测多种类样本；

　　开放性平台：兼容多糖、类病毒等多种类生物分子。

　　适配

　　待测蛋白丰度低；

　　检测蛋白丰度跨度大；

　　特殊珍贵样本；

　　需要单/多因子精准定量样本。

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　　04

　　CBA

　　原理

　　基于流式液相技术，通过微球标记抗体实现多因子同步检测。

　　特点

　　多因子检测：单孔最多测12个因子；

　　捕获效率高：捕获微球和样品呈悬浮态充分混合，接触均匀，易于捕获；

　　流式仪检测：常规流式检测流程，无需额外学习复杂操作。

　　适配

　　同时检测少量因子；

　　已有流式细胞仪，熟悉流式操作。

　　优质好物分享

　　4种蛋白定量方案并无绝对优劣之分，关键在于是否适配实验场景——无论是侧重少量因子检测的精准性，还是追求高通量分析的效率，亦或是受限于现有仪器设备，都能找到匹配的技术方案。

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